高效液相色譜柱怎么裝柱及使用介紹

高效液相色譜柱怎么裝柱

1. 色譜柱應該是可以直接接在勻漿罐上的，如果不能，則需要一個轉換接頭。這個轉換接頭的尺寸很重要，既要能防止漏液，又要避免過硬或尺寸不合適而導致色譜柱接口螺紋的損壞；

2. 具體裝柱過程一般來說是①先以合適的勻漿液（多為有機溶劑，劉國詮老師的《色譜柱技術》一書中列的比較全，可供參考）將填料充分分散（可以借助攪拌、超聲等方式）；②在填料勻漿的過程中，完成準備工作，即把色譜柱接在勻漿罐的下端（色譜柱不接勻漿罐的一段要接好篩板和柱頭，確保擰緊但不能擰死以免損壞色譜柱），打開勻漿罐上端和氣泵之間的接頭以便灌入勻漿液；③勻漿液罐好后，接好勻漿罐上端接頭，開始加壓；④選擇合適的壓力，就可以把填料壓實了；⑤穩定在適當的壓力上壓一定時間后，卸掉壓力，卸下色譜柱，把接勻漿罐這一段的填料抹平，裝上篩板和柱頭即可使用。

3. 裝柱是個困難的過程，需要耐心摸索壓力、勻漿液體積等參數，才能確保柱床均勻密實，達到好的柱效和峰形。如果裝的不好，則可能出現柱效不夠，或拖尾等問題。

 柱子使用

1、首先要確認您所要分析的樣品流動相的pH范圍是否在您的柱子的pH范圍之內，以免損壞柱子硅膠！

2、接下來就是用你做樣品的流動相去平衡柱子，如果您的流動相中含有緩沖鹽溶液，在平衡柱子之前務必要先用5％的甲醇(乙腈)/水去過渡10倍柱體積(150x4.6mm柱子約為30ml，250x4.6mm柱子約為45ml；下同)以上，再用帶鹽的流動相去平衡柱子足夠的時間(直到基線非常平穩為止)，之后方可進樣分析。

3、無論您分析何種樣品，都會由于各種原因樣品中總有部分雜質，因此建議您在進樣前在柱子前端加接保護柱以保護您那昂貴的分析柱，或者用0.2um或 0.45um針頭過濾器過濾樣品后方進樣分析！

高效液相色譜柱柱子清洗

分兩種情況進行：

1、  如果您的樣品分析只用到一般的甲醇，乙腈和水的流動相(包括流動相里面加了點酸)，在做完樣品后可直接用65％的乙腈/水或者純甲醇進行清洗10倍柱體積即可保存(如果時間有限，可視情況在儀器能承受的范圍內加快流速******為2ml/min)；

2、  如果您的樣品分析用到了含緩沖鹽或者酸或者離子對試劑的流動相，在做完樣品后的清洗必須按照下列2個步驟進行清洗柱子(不論您的柱子是否可以耐純水的極性柱子還是一般的通用性柱子)：

a、***重要的步驟——用5％的乙腈(甲醇)/水，清洗20倍柱體積溶劑以上，1~2ml/min(根據時間自由調節流速：如果因為時間來不及而清洗不了那么長時間，可以適當加大流速，比如1.5 or 2ml/min；LC/MS柱子應以0.2~0.5ml/min的流速進行)，